（3）值得指出的是，在SARS疫情中，多数实验室进行血细胞分析使用的是电阻法血细胞分析仪，其血细胞分类的原理是基于白细胞形态正常，根据细胞大小产生的脉冲大小进行细胞分类计数。换言之，只有细胞形态正常才能保证白细胞分类计数相对准确。根据对200多例SARS或“疑似”患者血涂片的观察，发现淋巴细胞和中性粒细胞均有中毒性变化及细胞体积的变化，约60%以上有“核凝”、“核固缩”和胞质中含中毒颗粒及空泡，70%以上的中性粒细胞有“核脊突”，这会影响仪器分类的准确性。因此在进行血细胞分析时，在做好防护条件下应重视血细胞显微镜检查，或使用高档“五分类”血细胞分析仪进行检查。
二、SARS特异性抗体
1．特异性抗体检测标准：符合以下两者之一即可判断为SARS：（1） 平行检测进展期血清抗体和恢复期血清抗体发现抗体阳转。（2） 平行检测进展期血清抗体和恢复期血清抗体发现抗体滴度4倍及以上升高。
2．技术说明：
（1）方法：WHO推荐酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunoabsorbent assay，ELISA）或免疫荧光试验（immunofluorescence assay，IFA）作为血清SARSCoV抗体检测方法。
（2）双份血清标本：SARS感染血清学诊断双份血清标本是最可靠的。注意尽可能早地采取进展期标本。
（3）平行检测：进展期和恢复期血清标本平行检测是非常重要的。ELISA法检测时应将双份血清标本置于同一块酶免疫反应板内，IFA法检测时应将双份血清标本置于同一张玻片，这样检测抗体滴度才有可比性。
（4）检测抗体的种类：国内目前SARSCoV抗体检测包括IgG、IgM或总抗体，其中任何一种抗体发生阳转或4倍及以上升高，均可诊断SARS。因IgG抗体持续时间较长，最好检测IgG抗体。
（5）试剂盒：应有国家有关机构颁发的应用许可证。
3.结果解释：检测进展期血清抗体和恢复期血清抗体，发现抗体阳转或4倍及以上升高，诊断SARSCoV近期感染。
根据WHO的资料，ELISA法检测患者血清SARS CoV抗体时使用发病21天后的血清标本所得结果比较可靠，而IFA法使用发病10天后的血清标本所得结果比较可靠。绝大多数SARS患者症状出现1个月内，应可测出IgG抗体。
需要注意的是，有些SARS患者血清抗体（IgG和/或IgM）在进展期已为阳性，恢复期血清没有4倍及以上升高，但这些患者双份血清存在高滴度的抗体，可结合临床进行诊断。未检测到SARSCoV抗体，不能排除SARSCoV感染。血清学抗体检测不作为早期诊断依据，检测及分析结果时应考虑试剂盒的质量。
三、SARSCoV RNA
1．SARSCoV RNA阳性判断标准：应用PCR方法，符合下列三项之一者可判断为检测结果阳性。
（1） 至少需要两个不同部位的临床标本检测阳性（例：鼻咽分泌物和粪便）。
（2）收集至少间隔2天的同一种临床标本送检检测阳性（例：2份或多份鼻咽分泌物）。
（3） 在每一个特定检测中对原临床标本使用两种不同的方法，或重复PCR方法检测阳性。
2．PCR检测结果的确认：
（1）使用原始标本重复PCR试验；
（2）在第二个实验室检测同一份标本。
3．实验室检测的几个问题：对PCR检测有如下要求。
（1）使用PCR方法进行SARSCoV检测的实验室应该有PCR 工作经验。应采用质控程序并确认一个合作实验室，以便于对阳性结果进行交叉核对。
（2）对SARSCoV特异性PCR试验阳性结果的确认应采用严格的标准，特别是在低流行区。
（3）SARSCoV检测用试剂盒应具有国家有关机构颁发的许可证，应包括已公布的对照、PCR引物及工作流程，应使用权威机构提供的RNA样本作为阳性RNA 对照。
（4）SARSCoV试验的敏感性取决于标本的收集和对患者检测的时间。采用PCR方法检测可能会得到假阴性的结果，而多个标本和多部位取材可增加试验敏感性。
（5）严格执行实验室操作标准，避免假阳性结果。
（6）在每次PCR操作过程中，应包括合适的阴、阳性对照。在提取中应有1份阴性对照，在PCR运行中应有1份水对照，在核酸提取及PCR运行中应有1份阳性对照；患者标本检测必须要有阳性对照，以便测出PCR抑制物（即设抑制对照）。
（7）扩增第二组基因区可进一步增加试验的特异性。
（8）患者出现症状后5～7天内采集标本阳性率最高。
4．标本的采集、运送及保存：
（1）漱口液：①采集：选择发病早期（最好5天之内）的病例采样有助于提高病毒检出率。应在患者进食2小时后采集标本，期间尽量少喝水。取无菌生理盐水5ml盛装在15ml标准带盖密封一次性无菌塑料离心管内，采样时可让患者先咳嗽数声，然后用5ml 无菌生理盐水漱口，漱口时让患者头部后仰，发出“噢”声，让采样液在咽部转动3～5秒，随后通过纸漏斗缓缓吐回离心管中。②运送与保存：标本应置于冰块环境中（预先准备冰壶）在2小时内尽快送至实验室。标本至实验室后，应尽快进行处理及检测。如果在24小时内可安排检测，标本可置于4℃保存；如果未能安排检测，则放-20 ℃保存；需要长期保存应置于-70℃。
（2）粪便：①采集：使用清洁便盆盛装患者粪便，用灭菌竹签挑取含脓、血或黏液的粪便置于15 ml标准带密封一次性无菌塑料离心管内。②运送与保存：标本应置于冰块环境中（预先准备冰壶）在2小时内尽快送至实验室。标本至实验室后，应尽快进行处理及检测。如果在24小时内可安排检测，标本可置于4℃保存；如果未能安排检测，则放-20 ℃保存；需要长期保存应置于-70℃。
四、T淋巴细胞亚群
1．外周血T淋巴细胞亚群检测诊断标准：大多数SARS患者外周血T淋巴细胞CD＋3、CD＋4、CD＋8亚群均减低，尤以CD＋4亚群减低明显。
2．检测方法：应用流式细胞仪（Flow Cytometer ，FCM）对相应荧光抗体标记的样本进行检测，计算CD＋3、CD＋3CD+4、CD＋3CD+8细胞的百分比和绝对值。
3．参考值范围：见表1。
表1 健康人外周血T淋巴细胞亚群参考值范围(±2s)
指标百分比(%)绝对值（×109（上标）/L）CD＋3691±186136±073CD＋3CD+4363±146072±042CD＋3CD+8249±134051±036CD+4/CD+8152±106
4．结果解释：
（1）百分比：SARS患者的CD+3、CD+4、CD+8亚群的百分比可减低或正常。
（2）绝对值：SARS患者的CD+3、CD+4、CD+8亚群明显减低，其中以CD+4亚群减低尤为显著。
（3）CD+4/ CD+8：正常或降低。
（4）个体差异：不同SARS患者之间存在着较大的个体差异，影响因素包括年龄、病情、病程、有无基础疾病、免疫功能状态等。
现已证实，T淋巴细胞介导的特异性细胞免疫功能低下是SARS患者的主要免疫病理改变之一，主要表现为T淋巴细胞及其亚群的明显受损，其中以CD＋3、CD+4、CD+8尤为明显。另外，糖皮质激素的应用也会使T淋巴细胞及亚群发生不同程度减低。因此，SARS患者外周血T淋巴细胞亚群（主要为CD＋3、CD+4、CD+8）的动态检测，有助于SARSCoV致病机制的研究和诊断，并且对于指导治疗（尤其是糖皮质激素应用的时机、剂量等）以及提示预后具有重要价值。但应用此标准诊断SARS时，应排除人类免疫缺陷病毒（HIV）和乙型肝炎病毒等感染、肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、血液系统疾病、肝肾疾病、糖尿病、器官移植等情况导致的CD＋3、CD+4、CD+8的变化。T淋巴细胞的受损程度与病情严重程度有明显相关性，即重型SARS患者较普通型明显，死亡病例T淋巴细胞亚群下降更为显著。另外，SARS患者T淋巴细胞的减低为可逆性改变，恢复期病例的T淋巴细胞及其亚群可逐渐接近或达到正常水平。
5． 注意事项：
（1）样本采集后应6小时内送检，24小时内完成检测。
（2）进行T淋巴细胞亚群检测的同时，应计数外周血淋巴细胞，用以计算各亚群（CD＋3、CD+4、CD+8）的绝对值。
（3）防止微小凝块阻塞流式细胞仪的吸样针，加样时应尽量避免将全血样本粘至样品测试管的侧壁上。
（4）防止单克隆抗体的损失，对样本进行荧光标记时应尽量避免将试剂粘至样本测试管的侧壁上。
（5）操作中应注意避免各荧光标记单克隆抗体的交叉污染。
五、鉴别诊断
1．鉴别诊断项目：在SARS早期诊断时，流感病毒（甲、乙、丙型）、副流感病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒、嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体及呼吸道细菌等检测有助于SARS的鉴别诊断。
2．实验方法：目前的实验方法主要有快速诊断、血清学诊断、分子生物学检测及病毒（衣原体、细菌）分离等方法。
（1）快速诊断：通常采用酶免疫分析（EIA）、间接免疫荧光法测定病原体的特异性抗原或抗体，操作简便、快速，结果准确可靠。
（2）血清学诊断：可采用补体结合试验、代谢抑制试验、间接血凝试验及间接免疫荧光试验等方法。应用双份血清检测，抗体效价增高4倍及以上有意义，一般用于流行病学调查。
（3）分子生物学检测：目前采用基因探针和PCR等方法。基因核酸杂交技术虽然敏感性和特异性高，但由于基因探针常用同位素标记，具有放射性污染，且设备要求高、操作繁琐，一般难以推广。PCR技术具有简便、快速、敏感、特异等特点，容易推广，但实验室的标准化问题有待于解决。
（4）病毒（衣原体、细菌）的分离：采用患者鼻咽分泌物接种人胚肺细胞或猴肾细胞培养，分离病毒和衣原体，再用补体结合或中和试验、IFA或ELISA等鉴定抗原。但细胞培养阳性率不够高，另外因技术操作复杂，实验设备要求较高，一般医院不具备培养条件，且敏感性受标本采集、运输、保存等因素影响，该实验方法不适合作为常规检测，多用于科研和疑难病例的鉴定。
