此单一式三份，第一联存根，第二联随样品，第三联由被采样单位保存
第二项 血清学诊断技术规范
一、血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验技术
(一)材料准备
1. 96孔V型微量反应板，微量移液器（配有滴头）。
2. 阿氏（Alsevers）液、鸡红细胞悬液，配制方法见附录A。
3. pH7.2的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）。
4. 高致病性禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴性血清。
(二) 操作方法
1. 血凝（HA）试验（微量法）
（1）在微量反应板的1－12孔均加入0.025mL PBS，换滴头。
（2）吸取0.025mL抗原加入第l孔，混匀。
（3）从第1孔吸取0.025mL抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025mL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃之，换滴头。
（4）每孔再加入0.025mL PBS。
（5）每孔均加入0.025mL 1%（V/V）鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
（6）振荡混匀，在室温（20℃－25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下1hr）。对照孔红细胞将成明显的钮扣状沉到孔底。
（7）结果判定。将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
2. 血凝抑制（HI）试验（微量法）
（1）根据血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。
（2）在微量反应板的1－11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。
（3）吸取0.025mL血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。
（4）1－11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025mL，室温（约20℃）静置至少30min。
（5）每孔加入0.025mL的鸡红细胞悬液轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下1hr），对照红细胞将呈显钮扣状沉于孔底。
(三)结果判定
以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有阴性对照孔血清滴度不大于21og 2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性；HI价等于41og 2为阳性。
