二、琼脂凝胶免疫扩散（AGID）试验
(一)材料准备
1. 硫柳汞溶液、pH7.2的0.01mol/L PBS溶液，配制方法见附录B。
2. 琼脂板：制备方法见附录C。
3. 禽流感琼脂凝胶免疫扩散抗原、标准阴性和阳性血清。
（二）操作方法
1. 打孔。在制备的琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径约5mm，孔距2mm－5mm，将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右侧边缘插入，轻轻向左侧方向将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。
2. 封底。用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要溶化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
3. 加样。用微量移液器或带有6～7号针头的0.25mL注射器，吸取抗原悬液滴入中间孔(图1的⑦号)，标准阳性血清分别加入外周的①和④孔中，被检血清按编号顺序分别加入另外4个外周孔（图1的②，③，⑤，⑥号孔）。每孔均以加满不溢出为度，每加一个样品应换一个滴头。
4. 作用。加样完毕后，静置5min～10min，然后将平皿轻轻倒置放入湿盒内，37℃温箱中作用，分别在24h、48h和72h观察并记录结果。
（三）结果判定
1. 判定方法。将琼脂板置日光灯或侧强光下观察，若标准阳性血清(图1的①和④号孔)与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，则试验成立。
2. 判定标准
(1)若被检血清孔（如图1中的②号）与中心抗原孔之间出现清晰致密的沉淀线，且该线与抗原与标准阳性血清之间沉淀线的末端相吻合，则被检血清判为阳性。
(2)被检血清孔（如图1中的③号）与中心孔之间虽不出现沉淀线，但标准阳性血清孔（如图1中的④号）的沉淀线一端向被检血清孔内侧弯曲，则此孔的被检样品判为弱阳性（凡弱阳性者应重复试验，仍为弱阳性者，判为阳性）。
(3)若被检血清孔（如图1中的⑤号）与中心孔之间不出现沉淀线，且标准阳性血清沉淀线直向被检血清孔，则被检血清判为阴性。
(4)被检血清孔（如图1中的⑥号）与中心抗原孔之间沉淀线粗而混浊或标准阳性血清与抗原孔之间的沉淀线交叉并直伸，被检血清孔为非特异反应，应重做，若仍出现非特异反应则判为阴性。
图1 AGP试验结果（略）
附录A HA和HI试验用溶液的配制
1．阿氏（Alsevers）液配制
