（报批稿）
发布 实施
国家质量技术监督局发布
目次
前言
1 范围
2 诊断原则
3 诊断标准
4 处理原则
附录A（规范附录）病原学诊断方法
附录B（规范附录）血清学诊断方法
附录C（资料附录）红细胞凝集抑制试验
附录D（资料附录）神经氨酸酶活性抑制试验
附录E（资料附录）对流免疫电泳及琼脂凝胶沉淀试验
附录F（资料附录）流感快速诊断方法
前言
流行性感冒(简称流感)为一种人、禽、畜共患的病毒性急性传染病。流感病毒根据其核蛋白（NP）和M1蛋白抗原性和基因特性的不同分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒常以流行形式出现，能引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并也能在动物中引起流感流行和造成大量动物死亡。乙型流感病毒能引起流感局部暴发，不会造成世界性流感大流行，至今除在人以外还能在海豹中分离到它。丙型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流感流行，它也能感染猪。流感常突然发生，迅速蔓延，波及面广，发病率和死亡率均高但病死率低。至今仍严重威胁着人的身心健康，甚至夺走性命，常给国民经济带来巨大损失，我国被世界公认为是流感的多发地。
受卫生部传染病防治监督管理办公室委托，由郭元吉同志负责对流行性感冒诊断标准及处理原则GB15944－1995进行修改，其目的：把过时的，不适用的删除，加入适用新的内容。具体修改之处如下：
1．前言中强调了流感为一种人、禽、畜共患病，同时考虑到禽流感病毒在人群中可引起的流感，其传播途径不清楚，故把传播途径删除。
2．诊断原则中增加了或从患者采集的标本中查到病毒颗粒特异的蛋白或特异核酸成分。
3．实验室诊断中去掉白细胞计数指标，因该指标不能做为流感的试验诊断依据。
4．附录A。病毒分离中，因甲型流感病毒“O”相特性的出现，故强调了细胞系统分离病毒的重要性；在HA测定中不应用鸡红细胞，而应用豚鼠或人的红细胞。
5．把B3神经氨酸酶抑制试验改为附录D。把B3中不规范的一律改为当今国际上统一使用的方法。
6．删除B2已过时，操作复杂，易受实验条件影响的“型特异性补体结合试验，改为附录E“对流免疫电泳”，同时考虑到对禽血清抗体测定时，常用琼脂凝胶沉淀试验。因此，在附录E中也加入后者的内容。
7．快速诊断为附录C改为附录F。同时加入FLU OIA Kit和RT－PCR法。
本标准的附录A和B是规范的附录。
本标准的附录C－F是资料的附录。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准起草单位：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
本标准主要修订人：郭元吉
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。
中华人民共和国国家标准
流行性感冒诊断标准及处理原则 GB
Diagnostic criteria and principles of management of influenza
1 范围
本标准规定了流感的诊断标准及处理原则。
本标准适用于各级医疗、卫生、保健机构和人员。
对流感的诊断，报告和处理的应用。
2 诊断原则
流感流行时一般可根据临床症状，结合流行病学资料可对患者作出初步诊断。如确诊则需要病毒分离阳性或病人双份血清抗体测定，其恢复期抗体滴度较急性期增高4倍或以上，或从患者采集的标本中查到病毒粒特异的蛋白或特异核酸成分。
3 诊断标准
3．1 流行病学资料
在流行季节一个单位或地区同时出现大量上呼吸道感染病人；或近期内本地区或邻近地区上呼吸道感染病人明显增多；或医院门诊呼吸道感染病人明显增多；或挨家挨户上呼吸道感染患者明显增多。
3．2 临床症状
3．2．1 出现急起畏寒、高热、头痛、头晕、浑身酸痛、乏力等中毒症状。
3．2．2 可伴有咽痛、干咳、流鼻涕等症状。
3．2．3 少数病例有食欲减退、伴有腹痛，腹胀、呕吐和腹泻等消化道症状。
3．3 实验室诊断
3．3．1 从病人鼻咽分泌物中可分离到流感病毒（见附录A）。
3．3．2 患者恢复期血清中抗流感病毒抗体滴度比急性期高4倍或以上（见附录B）。
3．3．3 在患者呼吸道上皮细胞查到流感病毒颗粒特异的蛋白成份或特异的核酸（见附录F）。
3．3．4 采集标本经敏感细胞将病毒增殖一代后，查到流感病毒粒特异的蛋白或特异的核酸（见附录F）。
3．4 病例分类
3．4．1 疑似病例（流感样病例）
具备腋下体温≥38℃，加上其他临床症状两项或以上，或加3、1及胃肠道症状两项或以上。
3．4．2 确诊病例
疑似病例加3.3.1或3.3.2或3.3.3或3.3.4。
4.处理原则
4.1 早期隔离病人，服抗流感病毒药物，对症治疗和防并发症。
早期发现病人，早期隔离(因地制宜，就地适当隔离)病人是重要的措施。对病人治疗一般采用对症疗法，发病早期(48小时内)可服用抗流感病毒药物，严重患者如严重肺炎，呼吸极度困难，高热不退等需住院治疗。防治并发症主要应防止流感病毒性肺炎和细菌性肺炎，尤其对年迈体衰者或伴有心血管，糖尿病，慢性呼吸道疾病者或婴幼儿等流感高危人群因他们由于流感本身或其它合并症可造成死亡，故应特别注意加强治疗护理。
4．2 预防措施
一般采用综合性措施，讲究卫生，注意体格锻炼和营养，保持室内空气流通；对易感人群应采取相对隔离措施，如避免接触病人，不去公共场所等；对年迈和健康状态差，尤其带有慢性病的人必要时可采用灭活疫苗接种，对疫苗过敏者或可能已被感染（如密切接触病人）者应及时服用抗流感病毒药物。
附录A 病原学诊断方法
（规范附录）
A1 病毒分离
从疑似流感病人呼吸道采集标本分离病原体．
A2 标本的采集
病毒分离成功与否很大程度上取决于采集标本的质量，时间（应于发病的头3天，越早越好），及其保存运输等环节。
标本主要取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物，有时也采用肺活检材料等。
常用的采样液为：普通肉汤，pH 7.4－7.6的Hanks氏液或Eagle氏液或水解乳蛋白液。在采样液中需加入抗菌素，以往多用青、链霉素，近来发现不少种类细菌对它们具有耐药性，故近来多用庆大霉素（其终浓度为每ml采样液中加入0.1ml的10mg/ml）和抗真菌素（终浓度为每ml采样液中加入0.008ml的250ug/ml）。
A2．1 标本采集方法
A2．2．1 鼻拭子
将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入4－5ml采样液的管中，尾部弃去。然后，塞紧或盖好管盖。
A2．2．2 咽拭子
用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入4－5ml采样液的管中，尾部弃去，塞紧或盖好管盖。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作 量。
A2．2．3 鼻咽抽取物或抽取气管和支气管分泌物
用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取气管和支气管分泌物。
先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3次。近来国内有用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器。
A2．2．4 漱口液
用10ml采样液漱口。漱时让患者头部微后仰，发噢声，让洗液在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集漱液。
注：取漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有，含漱液中不应含抗菌素。
A2．2．5 肺活检材料
肺活检组织在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入上述提到的抗菌素。
A3 标本运送
标本应在≤4℃条件下，尽快送至实验室。标本至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，48h内能进行接种可置4℃保存，如未能接种应置≤－70℃下保存。
A4 标本处理
标本至实验室后，含棉拭子的标本，先将棉拭子在管壁反复挤压后取出。然后用干净灭过菌的毛细吸管反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液。置4℃待其自然沉淀5－10min。
注：如采样液中尚未加抗菌素应补加之，所加的量同前，加完并混匀，置4℃1－2h后方可用于接种。
A5 接种与培养
最常用的为细胞接种和鸡胚接种法，有条件的应两法并用。近来由于“O”相毒株的出现，MDCK（Madin Dardy Canine Kidney）等一些细胞对“O”相毒株的敏感性大大超出鸡胚的敏感性。同时“O”相毒株几乎不凝集鸡红细胞，故近来在红细胞凝集和凝集抑制试验中常用豚鼠或人的“O”型红细胞，而不用鸡的红细胞。
A5．1 MDCK细胞接种和收获
成片的MDCK细胞弃生长液，用Hanks氏液洗两遍，将残余的牛血清洗净，每瓶加入接种标本0.5－1.0ml，（接种量要根据瓶的大小），一般2瓶/标本，轻晃细胞瓶，使标本完全覆盖细胞，置35℃吸附1－2h；倒掉感染液，再用Hanks氏液洗1－2遍，每瓶加入3ml（随瓶的大小而异）维持液（不含小牛血清，而含终浓度为2ug/ml胰酶的Eagle氏溶液），置35℃培养；次日起每天观察有无细胞病理变化（CPE）；当CPE出现+++～++++号时，即75%－100%细胞出现病变时进行收获，收获之前可将细胞冻融1－2次以提高收获标本的病毒滴度。由于CPE不能证实就是流感病毒所造成。最后还需检查维持液中是否有红细胞凝集活性（HA），用毛细吸管取细胞维持液3－4滴，放入血凝板孔中，而后加入等容量的1%豚鼠或人红细胞，轻摇混匀，置室温或4℃，1h后观察结果。出现红细胞凝集的为阳性标本，收获所有的维持液进行病毒鉴定。
如收获的维持液HA滴度不高或量不够用于鉴定，需在MDCK细胞中传代，把HA滴度提高或量增加后，方可进行病毒鉴定。
如HA阴性，应在MDCK细胞上盲传一代，如HA仍阴性，可认为是阴性标本，弃之。
注：CPE出现时间随感染病毒的型别，甚至毒株的差异以及感染量的大小而异。一般标本接种后7－10天还不出CPE，维持液中又查不出HA活性，基本上可认为阴性标本，弃之。同时要注意MDCK细胞的代数，因随MDCK细胞代数增加，其对流感病毒的敏感性下降。
A5．2 鸡胚接种和收获
取9－11日胚龄鸡胚，经羊膜腔和尿囊腔接种标本0.2ml，每份标本接种3－4只胚，置33－35℃培养72h。然后将鸡胚置4℃过夜（或置－20℃冰箱1h再置4℃数小时），分别收获尿囊液和羊水并检查HA活性（用毛细吸管分别取3－4滴尿囊液和羊水，分别置大孔塑料板不同孔内，再加入3－4滴1%豚鼠或人红细胞，摇匀后置室温或4℃1h后观察结果。如HA为+++～++++时，再按系列倍比稀释测定HA滴度，如具有一定的HA滴度即可进行病毒鉴定。如HA阴性，可盲传一代，如HA仍为阴性则弃之。
A6 病毒鉴定
至今对流感病毒鉴定最常用的方法为红细胞凝集抑制（HI）测定，因该法简便易行，结果可信（具体方法见附录C）。其次为神经氨酸酶活性抑制（NI）测定（具体方法见附录D）。进行型鉴定时常用对流免疫电泳（具体方法见附录E）。
附录B 血清学诊断方法
（规范附录）
B1 血清标本采集
血清标本应包括急性期和恢复期双份血清。急性期血样应尽早采集，一般不晚于发病后7天。恢复期血样则在发病后2－4周采集。单份血清一般不能用作诊断。血液标本2000－2500rpm离心15min。收集血清，弃血凝块。
B2 血清标本运送和保存
血清标本在4℃下运送，置≤－20℃下长期保存。
B3 抗体测定
测定用抗原一般为当前人群中流行的H3N2和H1N1亚型及乙型流感病毒。测定方法为HI法（见附录C）。
B4 结果判断
凡恢复期血清抗体滴度比急性期增高≥4倍为阳性结果，其余的均为阴性结果。
附录C 红细胞凝集抑制试验
（资料附录）
C1 原理
流感病毒粒表面的血凝素（HA）蛋白，含有识别和结合宿主细胞表面受体的结构，能够与一些哺乳类动物和禽的红细胞发生凝集，这就是红细胞凝集现象。
